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蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測
更新時間:2019-07-14   點擊次數(shù):2372次

蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測
酶抑制率法(分光光度法)試劑使用說明
      本試劑為國家標(biāo)準(zhǔn)快速檢驗方法GB/T5009.199-2003的配套試劑。酶活性和對農(nóng)藥的靈敏度指標(biāo)均達(dá)到或超過了國家標(biāo)準(zhǔn)要求,可以在各種型號的農(nóng)藥殘毒檢測儀(分光光度法)上使用,具有穩(wěn)定性好、靈敏度高和使用方便等特點。
一、試劑配制
1. 緩沖液試劑: 整包倒入大燒杯中,加1000mL純凈水溶解,酸堿度為pH8.0,常溫保存;
2. 乙酰膽堿酯酶: 取一支酶粉加20mL緩沖溶液溶解,4℃冰箱中保存,一周內(nèi)用完。也可將溶解后的酶液分成幾個小瓶,將其冷凍,用時融化,但不能重復(fù)多次冷凍、化解。
3. 顯色劑: 取一支顯色劑加入20mL緩沖溶液,避光保存;
4. 底物:取一支底物加20mL緩沖溶液,搖勻后置4℃冰箱中保存;
二、分析步驟
1. 樣品處理: 選取有代表性的蔬菜樣品,沖洗掉表面泥土,剪成1cm左右見方碎片,取樣品1g,(非葉菜類取2g)放入燒杯或提取瓶中,加入5mL緩沖溶液,手搖振蕩1~2分鐘,或超聲波振蕩30秒鐘,倒出提取液,靜置3~5min,待用。
2. 對照溶液測試: 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑,再加入2.5mL緩沖溶液,搖勻后于37°C放置15min,加入100微升底物搖勻,此時檢液開始顯色反應(yīng),應(yīng)立即放入儀器比色池中,記錄初始吸光度A1和反應(yīng)3 min時的吸光度A2,A2-A1=DA0。
3. 樣品溶液測試: 先于試管中加入100微升酶液和100微升顯色劑,再加入2.5mL樣品提取液,其它操作與對照溶液測試相同,記錄初始吸光度A1和反應(yīng)3 min時的吸光度A2,A2-A1=DAt。
三、結(jié)果計算
結(jié)果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。
抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100
      當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時,表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上。
      對陽性結(jié)果的樣品,可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
四、注意
1. 每批樣品的控制時間、溫度條件必須與對照溶液的條件*一致。
2. 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,不要剪的太碎。對一些含葉綠素較高的蔬菜,也不要剪的太碎。
3. 當(dāng)溫度條件低于37°C,酶反應(yīng)的速度隨之放慢,加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長,延長時間的確定,應(yīng)以膽堿酯酶對照溶液測試得到的吸光度A2-A1≥ 0.3以上,即可往下操作。當(dāng)對照溶液酶液的加入量大一些時,也可使A2-A1≥0.3上。
4. 當(dāng)吸光度大到無法讀取時,說明測定液渾濁有干擾。
五、產(chǎn)品有關(guān)技術(shù)指標(biāo)
1. 代表性農(nóng)藥的檢出下限見下表
農(nóng)藥名稱 檢出限mg/kg 標(biāo)準(zhǔn)要求檢出限mg/kg
甲安磷 0.65 2.0
氧華了果 0.5 0.8
2敵畏 0.01 0.1
呋南丹 0.01 0.3
2. 乙酰膽堿酯酶的活性:(室溫20°C以上進(jìn)行實驗)DA0≥0.3。
六、包裝及保存條件
每包可做200份樣品,0°C以下冰箱冷凍保質(zhì)期為三年,配成試劑后保存期為一周。

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